鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF重力預(yù)裝柱
| 【編號】BK-NRPB41S | 【CAS號】CAS | ||
| 【貨號】BK-NRPB41S-Z25 | 【規(guī)格】 | ||
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品 名：鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF
英文名：Streptavidin NUPharose Fast Flow, Streptavidin NUPharose FF
規(guī) 格：20 ml，100 ml，1L，1 ml預(yù)裝柱，5 ml預(yù)裝柱，特殊規(guī)格訂制
運(yùn) 輸：2 ~ 25℃，常壓、避光
貯 存：20%乙醇，2 ~ 8℃
保質(zhì)期：3年
相關(guān)介紹：
鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF是一種將鏈霉親和素（Streptavidin）鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)。
鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF是基于鏈霉親和素與生物素的特異性結(jié)合實現(xiàn)從生物樣品或混合物中分離純化生物素或生物素化的抗原、抗體、核酸等物質(zhì)。由于鏈霉親和素與生物素的結(jié)合力非常強(qiáng)，一般需要變性條件下才能將其分離，這容易導(dǎo)致樣品或配基失活。這個特性可用于抗原與抗體的分離，如將生物素化的抗體結(jié)合在凝膠上，然后利用抗原抗體的親和特性純化無生物素化的抗原，抗原洗脫時抗體不會被洗脫。反之亦可。
另外，鏈霉親和素與2-亞氨基生物素（2-iminobiotin）的結(jié)合相對生物素較弱，在pH 9.5 ~ 11.0時容易結(jié)合，pH 4.0時不需要變性劑即可洗脫，一般不影響樣品的活性和凝膠的活性。
技術(shù)指標(biāo)：
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基質(zhì) |
4%瓊脂糖凝膠微球 |
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配基 |
鏈霉親和素 |
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配基密度 |
~5 mg/ml |
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填料粒徑 |
60 ~ 180 μm |
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最大流速 |
800 cm/h |
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推薦流速 |
15 ~ 100 cm/h |
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pH穩(wěn)定性 |
短時間pH 2 ~ 11；長時間pH 4 ~ 9 |
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耐反壓 |
0.3 MPa |
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載量 |
≥300 nmol/ml生物素 ≥6 mg/ml生物素化蛋白 |
使用方法：
1 推薦緩沖液
1.1 純化生物素或生物素化物質(zhì)
結(jié)合緩沖液：20 mM NaH2PO4, 150 mM NaCl， pH 7.4
洗脫緩沖液：8 M 鹽酸胍，pH 1.5
1.2 純化2-亞氨基生物素或2-亞氨基生物素標(biāo)記的物質(zhì)
結(jié)合緩沖液：50 mM 碳酸銨，500 mM NaCl，pH 10.0
洗脫緩沖液：50 mM 乙酸銨，500 mM NaCl，pH 4.0
1.3 純化抗原或抗體
結(jié)合緩沖液：20 mM NaH2PO4，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脫緩沖液：100 mM 甘氨酸-鹽酸，pH 3.0
注：用于生物素化的抗體純化未生物素化的抗原（或生物素化的抗原純化未生物素化的抗體）有2種方法，①可先在游離狀態(tài)下抗原與抗體結(jié)合，然后當(dāng)樣品純化即可；②也可以將生物素化的抗體（或抗原）先結(jié)合柱上，然后對應(yīng)的未生物素化的抗原（或抗體）當(dāng)樣品純化。
2 樣品準(zhǔn)備
上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通�？捎猛肝�、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應(yīng)過0.45 μm濾膜或高速離心去除不溶物。
3 樣品純化
3.1 取適量的鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用結(jié)合緩沖液平衡5個柱體積，建議流速為100 cm/h。
3.2 將準(zhǔn)備好的樣品緩慢上柱，為保證樣品與鏈霉親和素充分結(jié)合，應(yīng)控制好上樣流速，建議流速為15 ~ 50 cm/h。
3.3 上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個柱體積以上，或平衡至基線，洗去雜質(zhì)，推薦流速為100 cm/h。
3.4 用洗脫緩沖液洗10 ~ 20個柱體積，建議流速為100 cm/h，收集的洗脫液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍，并根據(jù)需要置換緩沖液。
3.5 洗脫目的蛋白后的柱子應(yīng)立即用中性的結(jié)合緩沖液平衡，并用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一次純化。
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